时隔3年后，韩春雨发布最新研究成果论文

时隔3年，曾东南面舆论旋涡的韩呐喊公开了一项最新研究课题成果。近日，韩呐喊在先为印本该网站BioRxiv上登载了一篇关于基因编辑的新发表文章：Background free tracking of single RNA in living cells using catalytically inactive CasE。发表文章共有5名著者，分作为Feng Gao， Yue Sun， Feng Jiang， Xiaoyue Bai， Chunyu Han，社会已逝动各单位大多为河北科技所学校基因编辑研究课题之中心。其之中，韩呐喊为通讯著者。据认识到，专著之中提到的CasE是Ⅰ-EM- CRISPR一氧化氮的内部成分，它通过紧密结合特定的茎马蹄形周边单独处理pre-crRNA，称做 CasE Binding S，亦称为CBS。CasE保守His20参与底物，ΔHis26-TtCse3基因的CasE（dCasE）则保住了底物，但差不多与其靶标紧密紧密结合。在该研究课题之中，通过将 split 萤光与dCasE的N端和C-末端（ΔHis20）融汇，构筑了已逝体RNA来进行VN-dCasE-VC。该种系统仅在存在靶RNA时才收到萤光，从而提升信噪比。在已逝细胞内之中进行图形学的RNA，不需要特定的亚细胞内分布。CasE-GFP和dCasE-GFP在HEK293T细胞内之中的低水平解读和大多匀分布说明CasE和dCasE非常适合于已逝细胞内之中的RNA操作。为了测试CasE在哺乳类细胞内之中解读时是不是具有强已逝性，著者构筑了“重新启动”报告基因细胞核CBS-GFP-N1。它由5′-UTR之中的GFP mRNA和CasE紧密结合启动子（CBS）分成。当CasE被引入种系统时，GFP解读水平急剧下降。同时，为了进一步测试CasE已逝性，著者还构筑了“开启”报告基因细胞核RED-16×CBS-Lin28-C1，其之中CBS抽出RED单体基因的3′-UTR区和Lin28的中上游。Lin28是RNA核分裂存留波形，在其3′-UTR之中具有lin28波形的RED单体mRNA差不多不能翻成肽质。CBS-CasE依赖限制性切断lin28波形并从核分裂囚禁靶mRNA主要用途翻译（平面图1E和平面图1F）。这些说明CasE可以紧密结合并切割哺乳类细胞内之中的CBS。另外，为了将dCasE-CBS电磁力设计到RNA种系统之中，著者通过将split-FP5-7与dCasE肽紧密结合。发现一个版本，即VN-dCasE-VC很难收到萤光，这可能是由于不正确的折叠或不稳定性状态，但是当与靶RNA（CBS）紧密结合时，可以在萤光显微镜下清楚地捕获萤光波形，即使VN-dCasE-VC解读细胞核的转染偏高剂量非常偏高。接下来，著者用于VN-dCasE-VC种系统哺乳类细胞内之中过解读的β-肌动肽（β-Actin）的mRNA，VN-dCasE-VC种系统在细胞内质之中显示出强萤光。此外还捕捉到到，向靶mRNA加进非常多CBS可更佳波形，萤光非常清晰，因此，可以通过增加CBS的比例来检测偏高丰度的mRNA。总的来说，韩呐喊技术开发团队发明了一种新RNA来进行，将其命名为VN-dCasE-VC，该种系统能够已逝细胞内之中未背景的特定RNA，通过萤光将其图形学。目前已有两种已逝细胞内RNA扫描来进行，一种是MS2，一种是Cas13a，韩呐喊技术开发团队技术开发的dCasE种系统，扫描效果由于MS2，而且，dCasE肽的分子量为22kDa，少小于Cas13a的130kDa，dCasE的小分子量非常容易递送至细胞内内，因此非常非常适合主要用途已逝细胞内的RNA。一位差不多韩呐喊的香港市民暗示：“这篇名是此前韩呐喊社会已逝动的直到现在，目的都是技术开发基因编辑来进行。”不过，比如说的是，该研究课题目前登载于先为印本该网站，尚未经过同行评议，对此，有人才培养香港市民指出，首发在未经同行评议的先为印本上，是为了赢得首发权。“韩呐喊下一步还会投正式期刊的。”前述香港市民推测。不知道此次新研究课题成果是不是会终于给韩呐喊带来关注，2016年5年末，《自然—脊椎动物技术》登载韩呐喊技术开发团队新基因编辑技术NgAgo，被新闻界以“甘坐冷板凳、十年憋大招”的故事原M-炒作而一炮而红，此后半年，韩呐喊个人及其所在所学校陆续赢得各类荣衔和大量费用资助，但亦有国际间多名基因编辑领域科学界转发发声称试验结果难以重复，怀疑试验结果的真实性。2017年8年末，《自然—脊椎动物技术》登载文之中《是该信息说话的时候了》刊文，宣布撤回韩呐喊技术开发团队于2016年5年末2日登载在该期刊的专著。2018年9年末，河北科技所学校发布公告，韩呐喊技术开发团队不存在主观造假。但依据有关规定，取消韩呐喊所赢得的荣誉称号，取消韩呐喊技术开发团队担负起的人才培养项目并收回人才培养费用。韩呐喊技术开发团队回应称，试验设计存在局限性、研究课题现实生已逝存在着不严谨的问题。有出版界香港市民声称：“这波之后，NgAgo这个研究课题方向在之中国做得速度慢。韩呐喊他们的社会已逝动开展起来也比较困难，连学生也未新招。”